Keywords：NK細(xì)胞分離；NK細(xì)胞分選；磁珠分選NK細(xì)胞；NK細(xì)胞凍存液；NK細(xì)胞培養(yǎng)基；NK細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng)基；NK細(xì)胞擴(kuò)增試劑盒；自然殺傷細(xì)胞；細(xì)胞治療；NK細(xì)胞治療；Isolation of NK Cells；NK Cell Sorting；Magnetic Bead-Based NK Cell Isolation；NK Cell Cryopreservation Medium；NK Cell Culture Medium；NK Cell Expansion Medium；NK Cell Expansion Kit；Natural Killer cells；NK Cells; Cell Therapy；NK Cell Therapy； CAR-NK;

在腫瘤免疫治療、抗病毒-藥物開發(fā)、自身免疫疾病研究等領(lǐng)域，自然殺傷細(xì)胞（Natural Killer Cells, NK cells）正逐漸從幕后走向臺(tái)前。作為先天免疫系統(tǒng)的核心成員，NK細(xì)胞憑借其獨(dú)特的"快速殺傷"能力和"無需預(yù)敏"的特性，成為藥物研發(fā)中不-可或-缺的關(guān)鍵角色。因此，高純度NK細(xì)胞至關(guān)重要，IPHASE人NK細(xì)胞陰選試劑盒應(yīng)運(yùn)而生。

01    NK細(xì)胞的生理特性

自然殺傷細(xì)胞（Natural Killer cells，NK cells）不僅是免疫系統(tǒng)的"第一道防線"，更是藥物研發(fā)的關(guān)鍵突破口。

NK細(xì)胞具有獨(dú)特的免疫識(shí)別機(jī)制，不同于T細(xì)胞依賴的MHC呈遞抗原，NK細(xì)胞通過“丟失自我"和“誘導(dǎo)自我"機(jī)制識(shí)別靶細(xì)胞，使其在腫瘤異質(zhì)性環(huán)境中具有廣譜殺傷優(yōu)勢(shì)；此外，自然殺傷細(xì)胞（Natural Killer cells，NK cells）精準(zhǔn)調(diào)控激活性受體（NKG2D、NCRs、CD16）和抑制性受體（KIRs、NKG2A）的動(dòng)態(tài)平衡，為藥物開發(fā)提供多個(gè)可干預(yù)靶點(diǎn)。NK細(xì)胞的功能也多種多樣。已有研究表明，NK細(xì)胞通過穿孔素/顆粒酶途徑和死亡受體途徑（FasL/Fas、TRAIL/DR4/5）誘導(dǎo)靶細(xì)胞凋亡，產(chǎn)生直接細(xì)胞毒作用；其分泌IFN-γ、TNF-α、GM-CSF等細(xì)胞因子來調(diào)節(jié)免疫微環(huán)境，并具有適應(yīng)性免疫特征，為長效疫苗開發(fā)提供新思路。

正因?yàn)镹K細(xì)胞的獨(dú)特生理特性，其在抗體藥物（Antibody Drugs）開發(fā)、細(xì)胞治療（Cell therapy）領(lǐng)域及小分子藥物篩選等三面具有不可替代的優(yōu)勢(shì)。

【抗體藥物（Antibody Drugs）開發(fā)】

·抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性（Antibody-Dependent Cell mediated Cytotoxicity，ADCC）效應(yīng)優(yōu)化平臺(tái)

① CD16A（FcγRIIIa）多態(tài)性（158V/F）對(duì)單抗療效的影響評(píng)估

② Fc段工程化改造（如糖基化修飾、氨基酸突變）的體外驗(yàn)證系統(tǒng)

③雙特異性抗體（如CD16×CD30、CD16×BCMA）的效價(jià)測(cè)定

·檢查點(diǎn)抑制劑研究

①NK細(xì)胞特異性檢查點(diǎn)（NKG2A/HLA-E、KIR/HLA-C）抑制劑開發(fā)

②PD-1/PD-L1抗體對(duì)NK細(xì)胞功能的交叉影響評(píng)估

【細(xì)胞治療領(lǐng)域】

·CAR-NK技術(shù)突破

①第二代CAR設(shè)計(jì)（整合IL-15表達(dá)、自-殺基因開關(guān)）

②異體通用型解決方案（CRISPR敲除HLA-I/CD38避免排斥）

③冷凍保存技術(shù)對(duì)細(xì)胞活性的影響研究

·體外擴(kuò)增工藝開發(fā)

①不同細(xì)胞因子組合（IL-2/IL-15/IL-21）的增殖效率比較

②飼養(yǎng)細(xì)胞（如K562-mbIL21）與無飼養(yǎng)體系的效果評(píng)估

③代謝調(diào)控（如谷氨酰胺依賴性）研究

【 小分子藥物篩選】

·NK細(xì)胞激活劑開發(fā)

①小分子TLR激動(dòng)劑（如TLR8激動(dòng)劑VTX-2337）

②表觀遺傳調(diào)節(jié)劑（HDAC抑制劑增強(qiáng)NKG2D配體表達(dá)）

·免疫代謝調(diào)控

①mTOR抑制劑對(duì)NK細(xì)胞記憶形成的影響

②缺氧條件下NK細(xì)胞功能維持策略

簡而言之，NK細(xì)胞已從單純的效應(yīng)細(xì)胞發(fā)展為藥物研發(fā)的"多功能平臺(tái)"，其應(yīng)用貫穿靶點(diǎn)發(fā)現(xiàn)、藥物篩選、臨床前評(píng)價(jià)到治療方案優(yōu)化全流程。因此，合適的NK細(xì)胞分選技術(shù)在NK細(xì)胞應(yīng)用上顯得至關(guān)重要！

02    IPHASE NK細(xì)胞陰選試劑盒解鎖免疫治療藥物研發(fā)的關(guān)鍵鑰匙

隨著NK細(xì)胞在免疫治療中的地位日益凸顯，尤其是在通用型細(xì)胞治療（Cell Therapy）領(lǐng)域的巨大潛力，對(duì)高質(zhì)量、標(biāo)準(zhǔn)化NK細(xì)胞來源的需求將持續(xù)激增。然而，通過密度梯度離心法或陽性分選法等傳統(tǒng)分選法獲得的NK細(xì)胞，其結(jié)果卻不盡人意。

純度低：通過密度梯度離心等方法獲得的PBMC中，NK細(xì)胞占比僅5%-15%，雜質(zhì)細(xì)胞干擾嚴(yán)重。

耗時(shí)費(fèi)力：多步驟操作流程冗長，極大消耗研究人員的時(shí)間與精力。

批次差異不穩(wěn)定：手工操作難以保證分離結(jié)果的一致性，影響實(shí)驗(yàn)可重復(fù)性。

可能活化：某些陽性分選方法可能激活NK細(xì)胞，改變其天然狀態(tài)。

這些痛點(diǎn)直接制約著藥物研發(fā)中對(duì)NK細(xì)胞功能、藥效及安全性評(píng)價(jià)的準(zhǔn)確性。因此，合適的NK細(xì)胞分離（Isolation of NK Cells）或NK細(xì)胞分選（NK Cell Sorting）技術(shù)顯得至關(guān)重要！鑒于此IPHASE作為體外研究生物試劑引-領(lǐng)者，研發(fā)了人NK細(xì)胞陰選試劑盒，該試劑盒基于磁珠分選法(Magnetic Activated Cell Sorting, MACS)的原理，采用“排除法"策略，特異性去除PBMC中不需要的細(xì)胞類型（如T細(xì)胞、B細(xì)胞、單核細(xì)胞、樹突細(xì)胞、血小板等），從而富集高純度的未活化的磁珠分選NK細(xì)胞（Magnetic Bead-Based NK Cell Isolation），是目前效率-最-高的分選方法。

陰性分選（Negative Selection）其革命性意義體現(xiàn)在高純度、非活化、高效性和穩(wěn)定性等四個(gè)方面！

高純度：陰性分選（Negative Selection）得到的NK細(xì)胞輕松實(shí)現(xiàn)>90%純度，極大降低雜質(zhì)干擾。

天然狀態(tài)：陰性分選不依賴NK細(xì)胞表面標(biāo)志物，避免抗體結(jié)合導(dǎo)致的非預(yù)期活化，保留細(xì)胞原始狀態(tài)。

高效便捷：簡化操作流程（通常1-2小時(shí)內(nèi)完成），顯著提升實(shí)驗(yàn)效率。

穩(wěn)定可靠：試劑盒標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)，保證不同實(shí)驗(yàn)間、不同批次間結(jié)果的高度一致性。

IPHASE人NK細(xì)胞陰選試劑盒，以1×10^7個(gè)細(xì)胞為一個(gè)test，分別有10test和100test兩個(gè)規(guī)格，可供客戶從外周血單個(gè)核細(xì)胞中進(jìn)行NK細(xì)胞的分選，并對(duì)其進(jìn)行嚴(yán)格的質(zhì)量把控，包括細(xì)胞活率和細(xì)胞純度兩方面。下圖為IPHASE技術(shù)人員使用流式細(xì)胞儀記錄使用人NK細(xì)胞陰選試劑盒分選出的人NK細(xì)胞的純度變化，可以觀察到在分選前NK細(xì)胞在PBMC中的占比為10.6%，分選后NK細(xì)胞的純度提高到90.4%，其活率為92.5%，滿足客戶研究需求，說明IPHASE 人NK細(xì)胞陰選試劑盒是免疫治療藥物開發(fā)不-可或-缺的“好伴侶"！

IPHASE還已生產(chǎn)出相應(yīng)的NK細(xì)胞培養(yǎng)基（NK Cell Culture Medium）、NK細(xì)胞凍存液（NK Cell Cryopreservation Medium）、NK細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng)基（NK Cell Expansion Medium）和NK細(xì)胞擴(kuò)增試劑盒（NK Cell Expansion Kit），助力于客戶的NK細(xì)胞治療（NK Cell Therapy），如CAR-NK。且除了NK細(xì)胞陰選試劑盒外，小鼠NK細(xì)胞陰選試劑盒，同時(shí)針對(duì)猴、大鼠、犬等種屬均在陸續(xù)開發(fā)中，請(qǐng)各位客戶敬請(qǐng)期待......此外，IPHASE各種屬陽選試劑盒、適配體陽選及無痕分選試劑盒均已開發(fā)成功，具體產(chǎn)品及規(guī)格如下表所示：